Tinción de Gram

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Tinción empleada en microbiologíapara la visualización de bacterias en muestras clínicas. También se emplea como primer paso en la diferenciación bacteriana, considerandose Bacteria Gram-positivas a las bacterias que se visualizan de color violeta y gram negativas a las que se visualizan de color rosa.

Hay seis pasos a seguir para lograr la coloración, ya que contamos con la bacteria diluida en una gota de agua y fijada con un calor leve.

• Agregar Azul Violeta (Cristal Violeta) y esperar 30 segundos. (Moradas/Gram Positiva).
• Enjuagar con agua.
• Agregar Lugol y esperar 30 segundos.
• Enjuagar con agua.
• Agregar alcohol y acetona.
• Enjuagar con agua.
• Agregar Safranina y esperar 1 minuto. (Rosadas/Gram Negativa).
• Enjuagar con agua.

En estudio de muestras clínicas suele ser un estudio fundamental por cumplir varias funciones:

• Identificación preliminar de la bacteria causal de la infección
• Consideración de la calidad de la muestra biológica para el estudio, es decir permite apreciar el número de células inflamatorias así como de células epiteliales. A mayor número de células inflamatorias en cada campo del microscopio, más probabilidad de que la flora que crezca en los medios de cultivo sea la representativa del lugar de la infección. A mayor número de células epiteliales sucede los contrario, mayor probabilidad de contaminación con flora saprofita y la flora aislada en los medios de cultivos no es representativa del lugar de la infección.
• Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano. Los morfotipos bacterianos identificados en la tinción de Gram se deben de corresponder con aislamientos bacterianos realizados en los cultivos. Si se observan mayor número de formas bacterianas que las aisladas hay que reconsiderar los medios de cultivos empleados así como la atmósfera de incubación.

2Da definicion Tinción de Gram, método de identificación de bacterias mediante una tinción específica. Desarrollado por el médico danés Hans Christian Joachim Gram, es un procedimiento utilizado universalmente. En un primer momento las bacterias se tiñen con violeta de genciana (derivado metilado anilínico) y después se tratan con la solución de Gram (1 parte de yodo, 2 partes de yoduro potásico y 300 partes de agua); por último se lavan con alcohol etílico, y unas bacterias retienen el fuerte color azul de la violeta de genciana y otras se decoloran por completo. A veces se añade una contratinción con fucsina o eosina para teñir las bacterias decoloradas de color rojo y hacerlas más visibles. Se denominan bacterias Gram positivas a aquellas que retienen la tinción azul y bacterias Gram negativas a las que quedan decoloradas. Algunas bacterias presentan capacidad variable de tinción de Gram y se llaman Gram variables. Bacterias Gram positivas típicas son los estafilococos que producen forúnculos; Gram negativas representativas son la Escherichia coli de la flora intestinal o los bacilos de la tos ferina; Gram variables son los bacilos de Koch de la tuberculosis.